Dépistage des pathogènes moléculaires des mouches à poux (Diptera : Hippoboscidae) des ruminants domestiques et sauvages en Autriche

Parasites & Vecteurs volume 16, Numéro d'article : 179 (2023) Citer cet article

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Les mouches hippoboscides (Diptera: Hippoboscidae), également connues sous le nom de mouches poux ou keds, sont des ectoparasites suceurs de sang obligatoires des animaux et accidentellement des humains. Le rôle potentiel des hippoboscidés en tant que vecteurs d'agents pathogènes humains et vétérinaires est de plus en plus étudié, mais la présence et la distribution d'agents infectieux chez les mouches poux sont encore inconnues dans certaines parties de l'Europe. Nous rapportons ici l'utilisation de la génétique moléculaire pour détecter et caractériser les agents pathogènes à transmission vectorielle chez les mouches hippoboscides infestant les animaux domestiques et sauvages en Autriche.

Les mouches poux ont été collectées sur des bovins (n = 25), des moutons (n = 3) et des cerfs rouges (n = 12) infestés naturellement à travers l'Autriche entre 2015 et 2019. Les insectes individuels ont été identifiés morphologiquement au niveau de l'espèce et soumis à une extraction d'ADN pour dépistage moléculaire des agents pathogènes et codage à barres. L'ADN génomique de chaque pou a été criblé pour Borrelia spp., Bartonella spp., Trypanosomatida, Anaplasmataceae, Filarioidea et Piroplasmida. Séquences obtenues de Trypanosomatida et Bartonella spp. ont été caractérisés en outre par des analyses de réseau phylogénétique et haplotype.

Au total, 282 mouches hippoboscidés correspondant à trois espèces ont été identifiées : Hippobosca equina (n = 62) collectée sur des bovins, Melophagus ovinus (n = 100) sur des ovins et Lipoptena cervi (n = 120) sur des cerfs (Cervus elaphus). Le dépistage moléculaire a révélé l'ADN pathogène chez 54,3 % des hippoboscidés, y compris des infections par un seul (63,39 %), deux (30,71 %) et jusqu'à trois (5,90 %) agents pathogènes distincts chez le même individu. L'ADN de Bartonella a été détecté chez 36,9 % des mouches poux. Lipoptena cervi ont été infectés par 10 Bartonella sp. haplotypes, certains étroitement associés à des souches à potentiel zoonotique. L'ADN des trypanosomatidés a été identifié chez 34% des hippoboscidés, y compris la première description de Trypanosoma sp. chez H. equina. L'ADN d'Anaplasmataceae (Wolbachia spp.) n'a été détecté que chez M. ovinus (16 %), tandis que < 1 % des mouches poux étaient positives pour Borrelia spp. et Filarioidea. Tous les hippoboscidés étaient négatifs pour Piroplasmida.

Le dépistage génétique moléculaire a confirmé la présence de plusieurs agents pathogènes chez les hippoboscidés infestant les ruminants domestiques et sauvages en Autriche, y compris de nouveaux haplotypes d'agents pathogènes à potentiel zoonotique (par exemple Bartonella spp.) et le premier signalement de Trypanosoma sp. chez H. equina, suggérant un rôle potentiel de cette mouche à poux comme vecteur de trypanosomatidés animaux. Des études expérimentales de transmission et une surveillance élargie des mouches hippoboscides et des agents pathogènes associés à l'hippoboscide sont justifiées pour clarifier la compétence de ces ectoparasites en tant que vecteurs d'agents infectieux dans un contexte One-Health.

Les mouches hippoboscides (Diptera : Hippoboscidae), également connues sous le nom de mouches poux ou keds, sont des ectoparasites suceurs de sang obligatoires qui infestent les mammifères et les oiseaux du monde entier [1]. À ce jour, la plupart des recherches sur les hippoboscidés se sont concentrées sur la compréhension de leur biologie, de leur évolution, de la spécificité de leur hôte et de l'impact de leur comportement hématophage et mordant sur les animaux et les humains [2,3,4,5,6,7,8]. Diverses espèces de mouches à poux des genres Melophagus spp., Lipoptena spp. et Hippobosca spp. ont été décrits comme infestant couramment les ongulés domestiques et sauvages en Europe [9,10,11], et attaquant parfois aussi les humains et les animaux de compagnie [12,13,14,15]. En effet, il semble que les mouches hippoboscides aient pu attaquer les humains depuis des millénaires, comme le suggère l'identification du cerf commun ked Lipoptena cervi sur la momie humaine du néolithique tardif "Ötzi" dans les Alpes de l'Ötztal [16]. Compte tenu de leur nature hématophage, de leur large distribution et du large spectre d'hôtes de certaines espèces, les mouches hippoboscides peuvent également agir comme des vecteurs potentiels de maladies infectieuses au sein des populations animales et entre les animaux et les humains [17].

Les mouches hippoboscid ont été étudiées pour leur rôle de vecteurs d'agents pathogènes animaux pendant plus d'un siècle [18, 19], avec des études moléculaires au cours des 2 dernières décennies confirmant plusieurs agents pathogènes associés à l'hippoboscid d'importance médicale et vétérinaire chez différentes espèces de mouches poux [17] . Un large éventail de bactéries et de protozoaires à transmission vectorielle ont été identifiés chez les mouches hippoboscides prélevées sur des ruminants domestiques et sauvages dans certains pays européens, notamment Anaplasma spp., Babesia spp., Bartonella spp., Borrelia spp., Mycoplasma spp., Rickettsia spp. ., Theileria spp. et Trypanosoma spp. [20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31]. Malgré ces efforts de recherche, il existe encore d'importantes lacunes dans les connaissances concernant la présence et la surveillance des maladies émergentes à transmission vectorielle chez les mouches hippoboscides en Europe, y compris en Autriche. De plus, compte tenu de la large répartition des ruminants sauvages en liberté qui peuvent agir comme réservoirs d'agents infectieux en Autriche [32, 33] et de la présence humaine croissante dans les zones peuplées d'animaux sauvages en raison d'activités de travail ou de loisirs, le rôle de vecteur des hippoboscidés mérite une élucidation plus approfondie.

Le but de la présente étude était de détecter la présence d'agents pathogènes à transmission vectorielle chez les mouches hippoboscides infestant les ruminants domestiques et sauvages en Autriche à l'aide de techniques moléculaires. De plus, un code-barres ADN des mouches hippoboscides a été réalisé pour confirmer et caractériser leur identité.

Des mouches hippoboscides ont été collectées sur des cerfs rouges (Cervus elaphus ; n = 12), des moutons (Ovis aries ; n = 3) et des bovins (Bos taurus ; n = 25) dans divers endroits en Autriche, entre 2015 et 2019 (Fig. 1) . Des hippoboscidés infestant des cerfs rouges ont été échantillonnés en novembre/décembre 2016 et 2017 sur des animaux chassés sur trois sites : Schwaz (Fig. 1A) et Kufstein (Fig. 1B) dans l'État fédéral du Tyrol et Bludenz (Fig. 1C) dans l'État fédéral. État du Vorarlberg. Les cerfs chassés de ces zones sont régulièrement examinés dans le cadre de la surveillance de la tuberculose chez les animaux sauvages par l'Agence autrichienne pour la santé et la sécurité alimentaire (AGES). Des hippoboscidés ont été prélevés sur la peau de la tête de 12 cerfs récemment chassés soumis au laboratoire AGES, avec une présence estimée de keds de cerf dans 20 à 30 % de tous les cerfs chassés étudiés dans le cadre du programme de surveillance (W. Glawischnig, communication personnelle). Au total, 120 mouches poux ont été prélevées sur les animaux examinés. Les mouches pou des moutons ont été obtenues en mars 2018 directement dans une ferme de Leobersdorf, État fédéral de Basse-Autriche (Fig. 1D). A l'échantillonnage, l'exploitation possédait un troupeau de 30 ovins adultes, avec une présence observée de keds chez 100% des animaux. Au total, 100 keds de moutons ont été collectés directement sur 3 moutons adultes lors de la tonte. Des hippoboscidés de bovins ont été collectés sur des animaux au pâturage en juillet/août 2016 et 2017 dans la région de Saalfelden, État fédéral de Salzbourg (Fig. 1E), au cours d'une étude épidémiologique de 2 ans impliquant l'inspection des animaux à intervalles réguliers pendant la saison de pâturage [34]. À chaque occasion, 31 à 57 bovins ont été examinés visuellement et des mouches poux ont été observées chez jusqu'à 33 % des bovins (pic d'infestation en août). Au total, 61 individus d'hippoboscidés ont été collectés sur 24 bovins de Saalfelden entre 2016 et 2017 (certaines mouches poux étant collectées sur le même animal) après identification visuelle des insectes sur le pelage du bovin. Une autre mouche pou du bétail a été collectée à Eisenstadt en juillet 2019 (État fédéral du Burgenland, Fig. 1F). Sur tous les sites d'échantillonnage, les hippoboscidés ont été séparés des poils/laine manuellement ou à l'aide de pinces fines et stockés immédiatement soit à sec, soit dans de l'éthanol dans des tubes Eppendorf individuels. Tous les hippoboscidés ont été identifiés au niveau de l'espèce à l'aide d'un stéréomicroscope (Nikon SMZ1270, Tokyo, Japon) et de clés morphologiques [35, 36], suivis d'une extraction d'ADN.

Origine des mouches hippoboscides d'Autriche. Sites de collecte de mouches hippoboscides de ruminants domestiques et sauvages à Schwaz (A), Kufstein (B), Bludenz (C), Leobersdorf (D), Saalfelden (E) et Eisenstadt (F), en Autriche. Voir le texte principal pour plus d'informations

Les hippoboscidés individuels ont été soumis à une extraction totale d'ADN pour le dépistage moléculaire des agents pathogènes et le codage à barres des insectes. Des hippoboscidés individuels ont été mélangés avec 180 μl de tampon ATL (DNeasy Blood & Tissue Kits, Qiagen) dans des tubes Eppendorf de 1,5 ml, et deux billes de céramique de 1,4 mm (Qiagen, Hilden, Allemagne) ont été ajoutées par tube, suivies d'une homogénéisation mécanique dans un TissueLyser II (Qiagen, Hilden, Allemagne) à température ambiante pendant 6 min. Ensuite, 20 μl de protéinase K ont été ajoutés et les tubes ont été vortexés et incubés à 56 ° C pendant la nuit. Après incubation, l'ADN total a été extrait du matériel d'insecte à l'aide du kit QIAGEN DNeasy Blood & Tissue (QIAGEN, Hilden, Allemagne), en suivant les instructions du fabricant.

Pour confirmer l'identité de l'espèce et explorer la diversité génétique des hippoboscidés collectés, des spécimens sélectionnés ont été soumis à une analyse de code-barres ADN. L'ADN total extrait de 21 hippoboscidés a été utilisé pour amplifier une région dans le COI mitochondrial des insectes par PCR conventionnelle [37] comme décrit dans le tableau 1. Les produits de PCR ont été séquencés chez LGC Genomics GmbH (Berlin, Allemagne). Les séquences COI résultantes ont été utilisées pour la caractérisation taxonomique des espèces d'hippoboscidés par comparaison avec les séquences disponibles sur la base de données de nucléotides GenBank pour l'identification des organismes à l'aide de BLAST (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) et BOLD (www.boldsystems.org, consulté le 1er juin 2022).

L'ADN obtenu de chaque mouche hippoboscid a été criblé pour la présence de plusieurs agents pathogènes à transmission vectorielle en ciblant des gènes sélectionnés à l'aide d'amorces et de protocoles PCR résumés dans le tableau 1. Les hippoboscids ont été criblés par PCR conventionnelle pour les bactéries de la famille Anaplasmataceae (ARN ribosomal 16S) , le genre Borrelia (ARN ribosomique 16S) et le genre Bartonella (gène de la citrate synthase - gltA), ainsi que pour les nématodes de la superfamille des Filarioidea (gène de la sous-unité I de la cytochrome c oxydase mitochondriale - COI). De plus, l'ADN a été criblé pour les parasites des ordres Trypanosomatida (ARN ribosomal 18S) et Piroplasmida (ARN ribosomique 18S) en utilisant des PCR nichées. Les méthodologies de PCR étaient basées sur des protocoles précédemment publiés [38,39,40,41,42], à l'exception du protocole de PCR nichée pour Trypanosomatida, qui a été conçu pour la présente étude. Ces dernières amorces ont été conçues sur la base de toutes les séquences 18S de Trypanosomatida disponibles sur GenBank et permettent l'amplification de toutes les souches. Toutes les réactions de PCR ont été réalisées dans un Eppendorf Mastercycler Pro (Eppendorf AG, Hambourg, Allemagne). Les produits de PCR ont été stockés à 15 ° C jusqu'à confirmation des régions d'intérêt amplifiées par électrophorèse dans des gels d'agarose à 2% colorés avec le colorant Midori Green Advanced (Biozym Scientific, Allemagne). Les produits de PCR positifs pour les agents pathogènes étudiés ont été séquencés chez LGC Genomics GmbH (Berlin, Allemagne) à l'aide d'amorces d'amplification. Les séquences ont été assemblées avec BioEdit [43] et comparées aux séquences disponibles sur NCBI GenBank (National Center for Biotechnology Information; https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) en utilisant plusieurs recherches BLAST.

Séquences sélectionnées de Trypanosomatida et Bartonella spp. isolés des hippoboscidés étudiés ont été soumis à des analyses phylogénétiques comme décrit précédemment [44], avec des modifications. Les séquences ont été alignées et coupées aux régions de liaison des amorces, et les électrophérogrammes ont été vérifiés manuellement pour les doubles pics. Des pics doubles ont été identifiés chez 19/27 Bartonella spp. séquences, qui suggéraient une co-infection avec deux souches distinctes de Bartonella sp. chez les mêmes insectes. Dans ces cas, les deux souches ont été déphasées pour obtenir des séquences uniques et téléchargées en tant que séquences individuelles sur GenBank. Chaque souche a été téléchargée séparément sur GenBank (n° d'accès ON637624—ON637640 pour Trypanosomatida ; OP198738—OP198806 pour Bartonella spp.) et utilisée pour l'analyse phylogénétique.

Pour donner un aperçu de la diversité génétique des Trypanosomatida et Bartonella spp. détectés (et apparentés). souches, le maximum de vraisemblance (ML) et les arbres d'inférence bayésienne (BI) ont été calculés pour chacun des deux groupes sur la base d'alignements comprenant 409 séquences (991 positions de nucléotides) pour Trypanosoma spp. et 582 séquences (338 positions nucléotidiques) pour Bartonella spp. Les lacunes dans les alignements ont été supprimées en utilisant TrimAl v.1.3 [45], et les séquences ont été regroupées en haplotypes en utilisant DAMBE v.7.0.5.1 [46], laissant 167 haplotypes (701 positions nucléotidiques) pour Trypanosoma spp. et 261 haplotypes pour Bartonella spp. En tant qu'exogroupe de Trypanosoma spp. arbre, une séquence de Belchomonas wendygibsoni (KF054126) a été utilisée. Aucune séquence appropriée n'était disponible en tant qu'exogroupe pour Bartonella spp., et cet arbre était plutôt enraciné au point médian. Les arbres consensus bootstrap ML (1000 répétitions) ont été calculés à l'aide du serveur Web W-IQ-TREE [47] et en appliquant les modèles TIM3e + I + G4 pour Trypanosoma spp. et JC pour Bartonella spp., qui ont été suggérées comme étant les mieux adaptées à l'ensemble de données dans le test du modèle selon le critère d'information corrigé d'Akaike. Les arbres BI ont été calculés à l'aide de MrBayes v.3.2.7 [48] en appliquant le modèle complexe suivant GTR + G + I pour Trypanosoma spp. et JC pour Bartonella spp. Les analyses ont été menées sur 10 000 000 générations (nombre de chaînes : 4) en échantillonnant tous les millièmes d'arbres. Les premiers 25 % d'arbres ont été rejetés en tant que burn-in, et un arbre de consensus majoritaire de 50 % a été calculé sur la base des 7500 arbres restants. Les séquences pour les analyses du réseau d'haplotypes d'ADN ont été sélectionnées sur la base de clades bien pris en charge dans les arbres phylogénétiques (voir Fichier supplémentaire 1 : Fig. S1 et S2). Les réseaux d'haplotypes à jonction médiane ont été calculés avec le réseau 10.2.0.0 (Fluxus Technology Ltd., Suffolk, Royaume-Uni), en appliquant les paramètres par défaut. Les réseaux ont été préparés graphiquement et fournis avec des informations sur les pays et les hôtes dans Network Publisher v.2.1.2.5 (Fluxus Technology Ltd., Suffolk, Royaume-Uni) et finalisés avec CorelDRAW 2021 (Corel, Ottawa, Canada).

Le traitement des données et les statistiques descriptives ont été effectués dans Microsoft Excel et GraphPad Prism 7. Les analyses statistiques ont été implémentées dans la version R 4.0.3 [49]. Les différences de taux d'infection total (tous groupes d'agents pathogènes confondus) et de prévalence d'infection de chaque groupe d'agents pathogènes parmi les trois espèces d'hippoboscidés ont été évaluées par le test de proportions égales ou données (prop.test) et la comparaison par paires des proportions avec la méthode Holm-Bonferroni ( pairwise.prop.test). Les risques de chaque espèce d'hippoboscidés d'être infectée par un seul ou par deux agents pathogènes concomitants chez le même individu (positif/négatif) ont été évalués avec des modèles de régression logistique (glm, famille : "binomial") utilisant l'espèce de mouche pou comme variable explicative pour calculer rapports de cotes (OR) et intervalles de confiance à 95 % (IC à 95 %). Un niveau de P < 0,05 était considéré comme significatif.

Au total, 282 mouches à poux ont été collectées sur des bovins naturellement infestés (n = 25), des moutons (n = 3) et des cerfs rouges (n = 12) dans différentes régions d'Autriche. Les hippoboscidés ont été identifiés comme étant Hippobosca equina (n = 62 ; Fig. 2A) prélevé sur des bovins, Melophagus ovinus (n = 100 ; Fig. 2B) sur des moutons et L. cervi (n = 120 ; Fig. 2C) sur des cerfs rouges. Les analyses de codes-barres en BOLD de 21 hippoboscidés individuels (H. equina, n = 5 ; M. ovinus, n = 5 ; L. cervi, n = 11) ont révélé que les séquences COI de chaque espèce de mouche pou regroupées dans un numéro d'index de code-barres respectif avec des séquences précédemment signalées en Europe, en Afrique du Nord et en Asie pour H. equina (BOLD : AAX0882), M. ovinus (BOLD : AAX4771) et L. cervi (BOLD : ABX1452). Les séquences COI obtenues des hippoboscidés à code-barres ont été soumises à GenBank sous les numéros d'accès suivants : ON129173, ON129175, ON129176, ON129178, ON129181 (H. equina) ; ON129174, ON129177, ON129179, ON129180, ON129182 (M. ovinus); ON341137 – ON341147 (L.cervi).

Mouches hippoboscides pour le dépistage moléculaire des agents pathogènes. Individus représentatifs d'Hippobosca equina (A), Melophagus ovinus (B) et Lipoptena cervi (C) prélevés sur des ruminants domestiques et sauvages en Autriche

Le criblage moléculaire a révélé l'ADN pathogène chez 153/282 (54,3%) des hippoboscidés collectés, avec des différences substantielles entre les espèces de mouches poux (tableau 2). Les moutons élevés avec M. ovinus étaient significativement plus fréquemment infectés par des agents pathogènes par rapport à L. cervi (χ2 = 73,944, df = 1, P < 0,001) et H. equina (χ2 = 82,315, df = 1, P < 0,001), alors qu'aucune différence dans le taux d'infection total n'a été observée entre L. cervi et H. equina (χ2 = 2,7502, df = 1, P = 0,09 ; tableau 2). Sur les 153 individus positifs parmi les trois espèces d'hippoboscidés, 97 ne portaient qu'un seul agent pathogène (63,4%), 47 étaient infectés par deux agents pathogènes différents (30,7%) et trois agents pathogènes distincts ont été confirmés dans neuf spécimens de M. ovinus (5,9%). Les pourcentages d'hippoboscidés de chaque espèce infectés par un ou plusieurs agents pathogènes chez les mêmes individus sont illustrés à la Fig. 3. Parmi les trois espèces d'hippoboscidés, M. ovinus avait une probabilité significativement plus élevée d'être infecté par au moins un agent pathogène par rapport à H. equina. (OR M. ovinus : 2,8 [1,4–5,9], P < 0,01), tandis que L. cervi avait un risque légèrement plus élevé d'être infecté par un seul agent pathogène par rapport à H. equina (OR L. cervi [IC 95 %] 1,9 [ 0,95–4,05], P = 0,07). Melophagus ovinus était significativement plus susceptible d'être infecté par deux agents pathogènes simultanés par rapport à H. equina (OR = 47,1 [9,8–849,2], P < 0,001). Aucune différence n'a été observée dans le risque de porter deux pathogènes entre L. cervi et H. equina (OR = 1,02 [0,1–22,1, P > 0,5].

Infections simples et co-infections chez les mouches hippoboscides pathogènes positives. Pourcentage d'hippoboscidés positifs à un, deux ou trois agents pathogènes chez le même individu d'Hippobosca equina, Melophagus ovinus et Lipoptena cervi collectés sur des ruminants domestiques et sauvages en Autriche

Bartonella spp. a été détecté chez 36,9 % (104/282) des hippoboscidés étudiés, suivi de Trypanosomatida chez 34,0 % de tous les pous (96/282). Les individus de M. ovinus ont été trouvés plus fréquemment infectés par Bartonella spp. en comparaison avec H. equina (χ2 = 17,619, df = 1, P < 0,001) et avec L. cervi (χ2 = 10,283, df = 1, P < 0,001). Les moutons élevés avec M. ovinus étaient également plus souvent infectés par Trypanosomatida par rapport à H. equina (χ2 = 101,33, df = 1, P < 0,001) et à L. cervi (χ2 = 146,95, df = 1, P < 0,001). Seuls les individus de M. ovinus étaient positifs pour Anaplasmataceae dans 5,7 % (16/282 ; 5,7 % de tous les hippoboscidés étudiés) et moins de 1 % des mouches poux étaient positives pour Borrelia spp. (un spécimen de M. ovinus) et Filarioidea (un spécimen de L. cervi). Tous les hippoboscidés étudiés étaient négatifs pour Piroplasmida. Les séquences des agents pathogènes criblés dans la présente étude ont été déposées dans GenBank sous l'acc. : ON668330 (Borrelia spp.), ON678056 (Filarioidea), ON637624 – ON637640 (Trypanosomatida) et OP198738 – OP198806 (Bartonella spp.).

Bartonella spp. étaient les agents infectieux les plus fréquemment détectés chez H. equina et L. cervi, et le deuxième agent pathogène le plus fréquemment identifié chez M. ovinus après les trypanosomatidés (tableau 2, figure 3). Chez L. cervi, plusieurs Bartonella spp. Les séquences gltA (gène de la citrate synthase) ont montré une identité de 100 % avec une Bartonella sp. souche isolée de la chauve-souris Miniopterus schreibersii en Hongrie (MK140014 ; voir Fichier complémentaire 2 : Tableau S1). De plus, diverses Bartonella spp. Les séquences gltA de L. cervi ont montré > 99 % d'identité avec les séquences rapportées de B. schoenbuchensis isolées de chevreuils (Capreolus capreolus ; numéro d'accès GenBank : AJ278184 ; AJ278185) et de L. cervi (AJ564634 ; AJ564635 ; fichier supplémentaire 2) en Allemagne. Analyses du réseau d'haplotypes des Bartonella spp. Les séquences gltA de L. cervi ont révélé dix nouvelles souches non signalées auparavant (Fig. 4 et fichier supplémentaire 1), dont une souche (OP198738) identique à une Bartonella sp. séquence isolée de la chauve-souris M. schreibersii en Hongrie (Fig. 4). Contrairement à la grande diversité de Bartonella spp. détectées dans L. cervi, un seul haplotype a été identifié dans les séquences isolées de H. equina (OP198794), qui était identique à 100 % aux séquences de Bartonella chomelii signalées en Espagne, en France et en Nouvelle-Calédonie (KM215691 ; KM215690 ; JN646657 ; Fig. 4 et Fichier complémentaire 1). Les Bartonella spp. les séquences identifiées chez M. ovinus (OP198802) ont montré une identité à 100 % avec les séquences de Candidatus Bartonella melophagi de M. ovinus au Pérou, aux États-Unis et en Chine et d'un hérisson européen (Erinaceus europaeus) en Tchéquie (MZ089835 ; MT154632 ; Fig. 4 ; Fichier supplémentaire 2). Dans l'arbre BI (Fichier supplémentaire 1), les séquences de B. chomelii, Candidatus B. melophagi et Bartonella sp. regroupés dans un clade avec d'autres Bartonella spp. signalé précédemment chez les ruminants (probabilité a posteriori BI [BI pp] = 1,0, valeur bootstrap ML [ML bs] = 99). La plupart des séquences de B. chomelii, Candidatus B. melophagi et Bartonella spp. détectés dans la présente étude regroupés dans une sous-clade avec B. chomelii, B. schoenbuchensis, B. capreoli et Bartonella spp. séquences (BI = 1, ML = 100 ; fichier supplémentaire 1). Un seul Bartonella sp. La séquence de L. cervi (OP198746) a été placée dans un clade soeur séparé avec B. bovis et Bartonella spp. (IB = 0,98, ML = 85).

Diversité génétique de Bartonella détectée chez les mouches hippoboscides. Réseau d'haplotypes de jonction médiane des séquences gltA (338 pb) de Bartonella spp. à partir des études actuelles et précédentes montrant leur répartition géographique (A) et les hôtes signalés (B). Les cercles représentent les haplotypes et les nombres dans les cercles représentent le nombre d'individus. Si aucun chiffre n'est affiché, un seul individu est représenté. Les étiquettes à côté des cercles spécifient les numéros d'accession GenBank représentatifs des haplotypes ; les cercles blancs représentent les nœuds intermédiaires ; les barres sur les branches interconnectant les haplotypes représentent le nombre de substitutions. Les astérisques marquent les haplotypes détectés dans la présente étude

Des séquences de trypanosomatides (ARNr 18S) ont été détectées chez toutes les espèces d'hippoboscidés et représentaient les agents pathogènes les plus courants chez M. ovinus avec 87 % d'individus positifs (tableau 2, figure 3). Trypanosoma spp. les séquences isolées de M. ovinus étaient identiques à 100 % aux séquences 18S de Trypanosoma melophagium de Tchéquie, de Croatie et du Royaume-Uni (OM256700 ; HQ664912 ; FN666409). L'analyse du réseau d'haplotypes d'ADN a révélé deux souches distinctes de T. melophagium : une nouvelle souche (ON637626) et une seconde (ON637624) identiques aux séquences de T. melophagium isolées de M. ovinus en Croatie, au Royaume-Uni et en Tchéquie (Fig. 5 et Supplémentaire fichier 1). Seuls trois individus de H. equina (deux de Saalfelden et un d'Eisenstadt) étaient positifs pour les trypanosomatidés, avec un Trypanosoma sp. (ON637634) qui se regroupaient avec d'autres trypanosomatidés de ruminants, y compris Trypanosoma theileri, T. trinaperronei, T. melophagium, T. cervi et Trypanosoma spp. (Fig. 5 et Fichier complémentaire 1). Les séquences de Trypanosoma obtenues à partir de H. equina partageaient > 98 % de similarité avec celles de Trypanosoma cf. cervi isolé de cerfs de Virginie aux États-Unis (JX178196), Trypanosoma sp. de taons en Russie (MK156792-MK15794) et T. theileri obtenu à partir de mouches tsé-tsé en République centrafricaine (KR024688). Alors que les séquences de trypanosomatidés isolées de L. cervi présentaient > 99 % d'identité avec les séquences de kinétoplastides non parasites du genre Bodo du Royaume-Uni et des États-Unis (AY425015 ; AY028450).

Diversité génétique de Trypanosoma détectée chez les mouches hippoboscides. Réseau d'haplotypes à jonction médiane des séquences d'ARNr 18S (779 pb) de Trypanosoma spp. à partir des études actuelles et précédentes montrant leur répartition géographique (A) et les hôtes signalés (B). Les cercles représentent les haplotypes et les nombres dans les cercles représentent le nombre d'individus. Si aucun chiffre n'est affiché, un seul individu est représenté. Les étiquettes à côté des cercles spécifient les numéros d'accession GenBank représentatifs des haplotypes ; les cercles blancs représentent les nœuds intermédiaires ; les barres sur les branches interconnectant les haplotypes représentent le nombre de substitutions. Les astérisques marquent les haplotypes détectés dans la présente étude

Les séquences d'Anaplasmataceae (ARNr 16S) n'ont été détectées que chez 16 individus de M. ovinus, présentant des séquences identiques à celles de plusieurs souches de Wolbachia, dont une souche précédemment isolée de M. ovinus (MF461472 ; KY224164 ; KY224163). Borrelia spp. (ARNr 16S) a été détecté dans un seul M. ovinus et avait une similarité de 93,7 % avec un Borrelia sp. (CP043682) isolée de tiques associées à des oiseaux passeriformes. Enfin, un individu L. cervi présentait la séquence COI d'un nématode onchocercidé inconnu (Filarioidea), le plus similaire (95,1 %) à Mansonella perforata isolée du cerf Sika (Cervus nippon) au Japon (AM749265).

Ici, nous avons confirmé la présence moléculaire de divers agents pathogènes chez les mouches hippoboscides hématophages infestant les ruminants domestiques et sauvages en Autriche. Les trois espèces de mouches poux collectées et étudiées, L. cervi, M. ovinus et H. equina, ont une large distribution en Europe [1, 50]. Dans la présente étude, L. cervi et M. ovinus ont été collectés à partir de leurs hôtes primaires, cerfs et moutons, respectivement, tandis que tous les H. equina ont été obtenus à partir de bovins, l'un de leurs hôtes facultatifs [17]. Les trois espèces d'hippoboscidés étudiées différaient par leurs taux d'infection totaux et leurs prévalences d'infection pour les différents groupes d'agents pathogènes, les spécimens de M. ovinus étant significativement plus infectés que les individus de L. cervi et H. equina par au moins un agent pathogène (quel que soit le groupe d'agents pathogènes) , à Bartonella spp. et aux trypanosomatidés. Les moutons keds présentaient également un risque plus élevé d'être infectés par deux groupes d'agents pathogènes simultanés par rapport à L. cervi et H. equina. Cependant, des analyses moléculaires détaillées ont révélé différents agents pathogènes (au sein de chaque groupe d'agents pathogènes) infectant chaque espèce de mouches poux ; par conséquent, une comparaison des prévalences du même agent pathogène entre les hippoboscidés et leurs hôtes animaux n'est pas possible. Les différents agents pathogènes identifiés dans les trois espèces d'hippoboscidés, et le rôle probable de ces hippoboscidés en tant que vecteurs des agents pathogènes identifiés, sont discutés ci-dessous.

Bartonella spp. étaient les agents pathogènes les plus fréquemment détectés chez H. equina et L. cervi, et le deuxième chez M. ovinus. Toutes les Bartonella spp. dans notre étude correspondaient phylogénétiquement à des espèces de la lignée Bartonella II associées à des souches infectant les ruminants domestiques et sauvages [51]. Bartonella spp. ont été décrites pour la première fois chez H. equina, L. cervi et M. ovinus il y a près de 20 ans [20, 21], avec des preuves croissantes du rôle de ces hippoboscidés en tant que vecteurs de Bartonella [28, 30, 52, 53, 54, 55 ,56,57]. Fait important, nous avons trouvé dix Bartonella spp. distinctes et non signalées auparavant. souches de L. cervi prélevées sur des cerfs rouges. Sept de ces Bartonella spp. les souches étaient très similaires (> 99 %) à B. schoenbuchensis, un agent pathogène répandu infectant l'intestin moyen des cerfs [20, 28, 54]. Bartonella schoenbuchensis a été détectée moléculairement dans des échantillons de sang et de tissus de divers ongulés sauvages, dont le cerf rouge, le chevreuil et l'orignal (Alces alces), tous des hôtes naturels de L. cervi [1, 28, 58, 59, 60, 61]. Nos résultats suggèrent que B. schoenbuchensis et Bartonella spp. Les souches sont courantes chez L. cervi en Autriche et peuvent également circuler dans les populations locales de cerfs rouges sauvages. Ceci est remarquable dans un contexte One-Health, considérant que B. schoenbuchensis peut être transmis à l'homme, comme décrit par un rapport de bactériémie chez un patient souffrant de fatigue, de douleurs musculaires et de fièvre suite à une piqûre de tique [62]. De plus, B. schoenbuchensis a été suggéré comme agent étiologique de la dermatite du cerf chez l'homme mordu par L. cervi [20], avec des signes cliniques similaires à la maladie des griffes du chat causée par la zoonose Bartonella henselae [54, 63]. Par conséquent, la présence et la répartition de B. schoenbuchensis chez les cerfs sauvages, les cerfs et potentiellement d'autres arthropodes vecteurs en Autriche méritent d'être confirmées. De plus, un Bartonella sp. souche isolée de keds de cerfs dans notre étude appariée avec une Bartonella sp. séquence détectée chez la chauve-souris commune à ailes courbées M. schreibersii [64]. Cette Bartonella sp. et les souches de type B. schoenbuchensis identifiées dans notre étude se sont regroupées avec B. schoenbuchensis et B. chomelii dans l'analyse du réseau d'haplotypes d'ADN. Les deux autres Bartonella spp. les souches détectées dans L. cervi se sont regroupées dans une sous-clade distincte et étaient très similaires aux séquences de Candidatus B. melophagi signalées chez M. ovinus [65] et chez Bartonella sp. isolé du cerf Sika [66]. La diversité de Bartonella spp. les lignées détectées chez les cerfs dans la présente étude et la présence de co-infections avec deux Bartonella spp. les lignées de plusieurs individus indiquent que L. cervi sont des réservoirs pour une large gamme de Bartonella spp. souches en Autriche. Des études récentes ont également signalé la récupération de plusieurs Bartonella spp. souches à potentiel zoonotique chez les cerfs (Lipoptena cervi et L. fortisetosa) et chez les cervidés à travers l'Europe [27, 31, 33, 67], ce qui implique que ces ongulés sauvages peuvent agir comme hôtes réservoirs pour ces agents pathogènes. Par conséquent, compte tenu de la présence courante de cervidés sauvages en Autriche et des signalements croissants de cerfs attaquant les humains en Europe [3, 6, 13, 68], il est impératif d'étendre davantage la surveillance et l'identification des zoonoses Bartonella spp. dans les populations de cerfs et de cervidés.

Bartonella chomelii était la seule espèce de Bartonella détectée chez H. equina prélevée sur des bovins dans la présente étude. Bartonella chomelii a été décrite pour la première fois comme une espèce distincte de Bartonella à partir d'échantillons de sang de vaches en France [69], et des rapports ultérieurs dans différents pays ont confirmé sa présence à la fois chez les bovins [57, 70, 71] et H. equina [21, 56, 57 ]. Récemment, des criblages moléculaires ont également identifié B. chomelii dans des tiques prélevées sur des rongeurs et des chiens [72, 73]. En revanche, B. chomelii n'a pas été détecté chez les chevaux ou d'autres équidés (les hôtes primaires de H. equina) ou chez les chevaux parasitant H. equina [21, 71]. Il a été suggéré que les bovins pourraient être des hôtes accidentels pour B. chomelii, qui pourrait être plus étroitement apparenté à Bartonella spp. de ruminants sauvages que de souches isolées de bovins domestiques comme B. bovis [69]. Étant donné qu'il s'agit du premier signalement de B. chomelii en Autriche, d'autres études sont nécessaires pour comprendre la présence et l'impact potentiel de cet agent pathogène sur les populations de bovins et de ruminants sauvages. Des travaux antérieurs ont suggéré une prévalence plus élevée de B. chomelii chez les bovins plus âgés (> 2 ans) et les animaux élevés en alpage (> 600 m au-dessus du niveau de la mer) [57, 71]. Dans la présente étude, des H. equina positifs à B. chomelii ont été collectés dans des prairies de montagne (~ 1000 à 1450 m au-dessus du niveau de la mer ; données non présentées), situées dans les Alpes du Hohe Tauern de Salzbourg [34], ce qui suggère que les animaux pendant le pâturage alpin peuvent être à risque d'infections par B. chomelii, bien que cela reste à confirmer. À ce jour, il n'a pas été démontré que B. chomelii induisait la maladie chez les bovins, mais des infections par l'espèce apparentée B. bovis ont été associées à l'endocardite bovine [74].

Nos résultats ont confirmé que les Bartonella spp. les séquences détectées chez M. ovinus appartenaient à Candidatus B. melophagi, l'un des agents pathogènes les plus courants dans les populations ovines [21, 53, 56]. On pensait autrefois qu'il n'était qu'un endosymbionte de keds de mouton non transmissible aux ruminants [21], de nouvelles preuves ont confirmé la présence de Candidatus B. melophagi chez le mouton, y compris sa culture réussie à partir de sang ovin, suggérant ainsi que le mouton peut servir de réservoir hôte. pour ce pathogène, avec M. ovinus comme vecteur probable [55, 75]. Cependant, on ne sait toujours pas si Candidatus B. melophagi peut provoquer une maladie clinique chez les ovins et si M. ovinus est un vecteur compétent transmettant ces bactéries. Fait important, Candidatus B. melophagi a été isolé à partir d'échantillons de sang de deux patients humains présentant des symptômes non spécifiques tels que des problèmes cardiovasculaires, des douleurs et de la fatigue [76]. Bien que ces deux patients aient déclaré des contacts fréquents avec des animaux domestiques et sauvages, il n'y avait aucune preuve d'une voie d'infection possible ou d'une causalité réelle entre les infections à Candidatus B. melophagi et les symptômes cliniques [76]. Par conséquent, le potentiel zoonotique de Candidatus B. melophagi et le rôle de M. ovinus en tant que vecteur nécessitent une élucidation plus approfondie.

Dans la présente étude, T. melophagium était la seule espèce de trypanosomatide détectée dans M. ovinus, avec un taux d'infection élevé parmi les moutons étudiés. Trypanosoma melophagium est connu pour infecter les troupeaux de moutons et les moutons depuis plus d'un siècle [18, 77], et la présente étude s'ajoute aux quelques enquêtes génétiques moléculaires précédentes confirmant sa forte prévalence chez M. ovinus prélevé sur des moutons en Écosse [22], Croatie [25] et récemment Tchéquie [78]. Des études phylogénétiques ont conclu que T. melophagium est une seule espèce limitée à M. ovinus et aux moutons ; c'est un membre du sous-genre Megatrypanum, qui comprend d'autres agents pathogènes restreints à l'hôte infectant les ruminants domestiques et sauvages tels que Trypanosoma theileri chez les bovins [25, 79]. Les premiers travaux ont rapporté une parasitémie absente ou très faible de T. melophagium chez les moutons infestés par M. ovinus porteur de ce pathogène, et il a été suggéré que les moutons peuvent être infectés par T. melophagium simplement par ingestion orale de keds de mouton [18, 25]. À ce jour, il n'existe aucune preuve que T. melophagium puisse provoquer une maladie chez les ovins ou être transmis à d'autres espèces de ruminants ou de mammifères, et il a été proposé qu'il n'est pas pathogène pour M. ovinus infecté [80]. Néanmoins, nos résultats suggèrent que les moutons infestés par M. ovinus en Autriche pourraient être infectés par T. melophagium, et cela devrait être confirmé, en particulier dans les élevages ovins utilisant peu ou pas d'ectoparasiticides pour le contrôle des moutons (par exemple, les fermes biologiques). , comme décrit précédemment [25].

Notre travail a identifié un Trypanosoma sp. souche chez trois individus de H. equina prélevés sur des bovins dans deux états différents d'Autriche (Salzbourg et Burgenland). Au meilleur de la connaissance des auteurs, il s'agit du premier signalement de Trypanosoma sp. chez H. equina, indiquant ainsi un rôle potentiel de cet hippoboscidé en tant que nouveau vecteur de trypanosomatidés animaux. Dans notre analyse phylogénétique, ce Trypanosoma sp. souche regroupée avec des séquences du groupe T. theileri et était très similaire à Trypanosoma cf. cervi isolées de cerfs de Virginie (Odocoileus virginianus) aux États-Unis [81], avec des souches de type T. theileri de taons Hybomitra tarandina, Chrysops divaricatus et Hybomitra muehlfeldi en Russie [82] et avec T. theileri obtenu à partir de la mouche tsé-tsé Glossina fuscipes en République centrafricaine [83]. Une précédente étude en Autriche a révélé une prévalence élevée d'espèces appartenant au complexe T. theileri/cervi chez les moustiques, suggérant une large distribution de ces agents pathogènes chez les hôtes animaux, potentiellement des ruminants sauvages [84]. Par conséquent, Trypanosoma sp. détectée chez H. equina dans le présent travail pourrait appartenir au groupe/complexe T. theileri, ce qui pourrait être élucidé par de futures études moléculaires surveillant les trypanosomatidés chez H. equina et les bovins en utilisant divers gènes cibles. En outre, étant donné que T. theileri n'a pas encore été signalé comme infectant les bovins en Autriche mais est présent dans les pays voisins [85, 86], la confirmation de T. theileri dans des vecteurs tels que H. equina et les mouches tabanidés, ainsi que dans bovins autrichiens, est justifiée. Des études de génétique moléculaire sur des trypanosomatides telles que des souches de type T. theileri ont également été signalées chez les cerfs Lipoptena fortisetosa et L. cervi en Pologne et en Tchéquie [29, 78], mais elles n'ont pas été détectées dans la présente étude. En ce qui concerne les trypanosomatidés détectés dans le cerf L. cervi, nous avons identifié des séquences très similaires à Bodo sp., qui sont des kinétoplastides non parasites (sous-ordre Bodonina) présents dans le sol et l'eau. Bien que Bodo spp. ont été isolés à partir d'ectoparasites de chauve-souris et de woylie Bettongia penicillate, un marsupial australien, ces découvertes ont été associées à une contamination environnementale des hôtes mammifères plutôt qu'à une infection [87, 88]. Par conséquent, nous ne pouvons pas exclure la contamination environnementale dans nos échantillons et d'autres études sont nécessaires pour évaluer le rôle de Bodo sp. chez les hippoboscidés.

Dans la présente étude, les Anaplasmataceae n'ont été détectées que dans les troupeaux de moutons et identifiées comme Wolbachia spp. souches, qui sont des endosymbiontes connus de nématodes et d'arthropodes, y compris des hippoboscidés tels que H. equina et M. ovinus [56, 65, 89, 90]. Les séquences 16S de Wolbachia étaient identiques à celles des souches précédemment isolées de M. ovinus [91]. À ce jour, le rôle ou les effets spécifiques de Wolbachia sur M. ovinus et d'autres mouches hippoboscides sont inconnus [90]. Aucune Anaplasmataceae pathogène n'a été détectée chez les hippoboscidés étudiés, bien que M. ovinus et L. cervi puissent être infectés par Anaplasma ovis [23, 92] et A. phagocytophilum [24], respectivement. Considérant qu'il a été confirmé que la zoonose A. phagocytophilum infecte les cervidés et les bovidés sauvages en Autriche [33, 93, 94], des travaux supplémentaires sont nécessaires pour étendre la surveillance des Anaplasmataceae pathogènes chez les mouches hippoboscides et leurs hôtes ruminants, alors que le seul Borrelia- l'hippoboscide positif détecté était un individu de M. ovinus infecté par une souche inédite à 93,7 % similaire à un isolat de Borrelia dénommé A-FGy-1 et à Candidatus Borrelia mahuryensis isolé de tiques néotropicales associées aux passereaux [95]. Un premier travail a confirmé la présence de Borrelia burgdorferi sensu lato, l'un des agents responsables de la maladie de Lyme chez l'homme, chez M. ovinus [96]. Le Borrelia sp. La séquence 16S obtenue dans notre étude était similaire à 92,9 % à deux séquences de B. burgdorferi téléchargées sur GenBank (AJ224138 et AJ224134). Compte tenu du risque zoonotique potentiel de B. burgdorferi, de nouvelles études devraient caractériser l'identité et la distribution de Borrelia spp. dans les troupeaux de moutons en Autriche. Enfin, un seul individu de L. cervi était positif pour Filarioidea, présentant la séquence COI d'un onchocercidé inconnu avec une similitude génétique de 95 % avec le filaroïde dermique Mansonella perforata, précédemment isolé chez le cerf Sika [97, 98]. L'appartenance de cette séquence d'onchocercidés à M. perforata ou à une autre espèce de Mansonella, non séquencée auparavant, doit être confirmée, ainsi que leur distribution potentielle dans les populations de cerfs rouges et de cerfs en Autriche.

Étant donné que les mouches hippoboscides collectées dans la présente étude ont été isolées suite à un échantillonnage de commodité dans des fermes sélectionnées avec une prévalence d'infestation élevée attendue (ovins/bovins) et des animaux chassés dans le cadre d'un programme de surveillance de la tuberculose (cerfs), nos résultats ne permettent pas une estimation précise. de la prévalence à l'échelle nationale des agents pathogènes associés à l'hippoboscide en Autriche. Cependant, nos données décrivent la présence généralisée d'agents pathogènes chez les mouches poux infestant les ruminants dans diverses régions géographiques. Par conséquent, nos résultats confirment la nécessité de surveiller les hippoboscidés et les maladies transmises par les hippoboscidés infectant les ruminants domestiques et sauvages en Autriche, et potentiellement dans d'autres régions européennes, à plus grande échelle. D'autres agents pathogènes précédemment signalés chez les mouches hippoboscides mais non étudiés dans la présente étude pourraient également être inclus dans de futures enquêtes moléculaires telles que Rickettsia spp., Theileria ovis, Acinetobacter spp., Bacillus spp., Staphylococcus spp., Virus de la langue bleue, Border Disease virus et Corynebacterium pseudotuberculosis [17]. De plus, l'impact du changement climatique sur la distribution et la dynamique saisonnière des mouches poux devrait être étudié. De toute évidence, la surveillance des agents pathogènes zoonotiques potentiels dans les réservoirs d'animaux (sauvages) doit être étendue en Autriche, comme l'indique la récente confirmation d'Anaplasma phagocytophilum et de Babesia spp. chez les ongulés sauvages [33].

Ce travail contribue aux efforts de recherche en cours visant à clarifier le rôle des mouches hippoboscides suceuses de sang en tant que vecteurs d'agents infectieux d'importance vétérinaire et médicale. Cependant, la présence d'agents pathogènes associés à l'hippoboscide confirmée par PCR et séquençage ne prouve pas la compétence vectorielle des espèces de mouches poux étudiées pour ces agents pathogènes et ne fait que suggérer leur potentiel vecteur. La compétence vectorielle est la capacité des arthropodes à acquérir et à transmettre le stade infectieux d'un pathogène à un hôte vertébré, y compris la réplication du pathogène dans le vecteur. Elle nécessite des preuves expérimentales, épidémiologiques et cliniques concluantes de la transmission de l'agent pathogène du vecteur à l'hôte et de l'infection qui s'ensuit [99, 100]. Pour les hippoboscidés, il existe des preuves que Bartonella spp. peut être transmis verticalement dans L. cervi, l'agent pathogène étant détecté dans le sang des cerfs adultes se nourrissant de ruminants, dans les pupes et dans les mouches adultes non nourries qui n'avaient pas encore commencé à se nourrir de sang [54]. Cependant, si L. cervi peut transmettre Bartonella spp. à un hôte vertébré reste à confirmer. En outre, il convient encore de clarifier si les agents pathogènes détectés dans L. cervi (par exemple Bartonella spp.) ont un potentiel zoonotique, quelle est l'étendue de ces agents infectieux dans les populations de ruminants sauvages en Autriche et si ces animaux peuvent agir comme réservoirs d'agents pathogènes qui pourraient être vectorisé par des cerfs keds. Ceci est extrêmement important compte tenu de l'exposition potentielle des humains aux piqûres de L. cervi infectées par Bartonella pendant les activités de travail ou de loisirs (par exemple les chasseurs, les travailleurs forestiers, les randonneurs).

En conclusion, le dépistage génétique moléculaire a confirmé la présence de plusieurs agents pathogènes chez trois espèces d'hippoboscidés infestant les animaux domestiques et sauvages en Autriche, certains représentant potentiellement des risques zoonotiques émergents tels que Bartonella spp. Nous rapportons plusieurs nouvelles séquences pathogènes chez les hippoboscidés qui peuvent contribuer aux efforts de recherche en cours pour comprendre le rôle de vecteur des mouches poux, y compris la première détection de Trypanosoma spp. chez H. equina. Une surveillance élargie des hippoboscides et des agents pathogènes transmis par les hippoboscids est justifiée pour clarifier la distribution et l'impact de ces ectoparasites en tant que vecteurs d'agents infectieux émergents d'importance pour la santé publique et animale dans un contexte One-Health.

Toutes les données générées ou analysées au cours de cette étude sont incluses dans cet article publié [et ses fichiers d'informations supplémentaires].

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Le soutien financier a été fourni par le ministère fédéral autrichien de l'éducation, des sciences et de la recherche (code-barres autrichien de la vie—Hochschulraum-Strukturmittel).

Le financement en libre accès pour cet article a été fourni par l'Université de médecine vétérinaire de Vienne (Vetmeduni Vienne). Nous reconnaissons le soutien financier du ministère fédéral autrichien de l'éducation, de la science et de la recherche (Code à barres autrichien de la vie - Hochschulraum-Strukturmittel).

Institut de parasitologie, Département de pathobiologie, Université de médecine vétérinaire de Vienne, Vienne, Autriche

Miguel Peña-Espinoza, Daniel Em, Bita Shahi-Barogh, Dominik Berer, Georg G. Duscher, Lara van der Vloedt, Maria S. Unterköfler & Hans-Peter Führer

Agence autrichienne pour la santé et la sécurité alimentaire (AGES), Services de recherche, Vienne, Autriche

George G. Doucher

Agence autrichienne pour la santé et la sécurité alimentaire (AGES), Institut de contrôle des maladies vétérinaires, Innsbruck, Autriche

Walter Glawischnig

Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Centre de recherche Kathrinenhof, Rohrdorf, Allemagne

Steffen Rehbein

Institut de pathologie, Département de pathobiologie, Université de médecine vétérinaire de Vienne, Vienne, Autriche

Joseph Harl

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HPF a conçu la recherche et levé les fonds. DE, BSB, LvdV et MPE ont effectué des travaux de laboratoire de génétique moléculaire. JH a conçu les amorces Trypanosomatida. DB, GD, WG et SR étaient responsables de l'échantillonnage sur le terrain des mouches hippoboscidés. JH et MSU ont réalisé les analyses phylogénétiques. MPE a rédigé la première ébauche. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

Correspondance à Hans-Peter Führer.

N'est pas applicable.

Les auteurs ne déclarent aucun intérêt concurrent.

Springer Nature reste neutre en ce qui concerne les revendications juridictionnelles dans les cartes publiées et les affiliations institutionnelles.

Arbre d'inférence bayésien comportant des séquences gltA de Bartonella spp. Les nœuds sont marqués avec des probabilités a posteriori d'inférence bayésienne et des valeurs de bootstrap de probabilité maximale. Les clades marqués d'une barre rouge ont été utilisés pour le calcul des réseaux d'haplotypes à jonction médiane contenant les séquences obtenues dans cette étude. La barre d'échelle indique le nombre moyen attendu de substitutions par site selon le modèle d'évolution de séquence appliqué. Figure S2. Arbre d'inférence bayésien présentant des séquences d'ARNr 18S de Trypanosoma spp. Les nœuds sont marqués avec des probabilités a posteriori d'inférence bayésienne et des valeurs de bootstrap de probabilité maximale. Les clades marqués d'une barre rouge ont été utilisés pour le calcul des réseaux d'haplotypes à jonction médiane contenant les séquences obtenues dans cette étude. La barre d'échelle indique le nombre moyen attendu de substitutions par site selon le modèle d'évolution de séquence appliqué.

Analyse par dynamitage de Bartonella spp. séquences obtenues à partir de keds collectés sur des ruminants domestiques et sauvages en Autriche.

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Réimpressions et autorisations

Peña-Espinoza, M., Em, D., Shahi-Barogh, B. et al. Dépistage moléculaire des pathogènes des mouches à poux (Diptères : Hippoboscidae) des ruminants domestiques et sauvages en Autriche. Vecteurs parasites 16, 179 (2023). https://doi.org/10.1186/s13071-023-05810-4

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Reçu : 01 mars 2023

Accepté : 14 mai 2023

Publié: 02 juin 2023

DOI : https://doi.org/10.1186/s13071-023-05810-4

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